本试剂盒仅限于科学研究使用,严禁用于医学诊断。该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测。首先,在预先包被尊龙凯时的adropin(AD)抗体微孔中,依次添加样本、标准品及HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤处理后,添加底物TMB进行显色反应。在过氧化物酶的催化下,TMB转化为蓝色,随后在酸性条件下变化为最终的黄色。颜色的深浅与样品中adropin(AD)的含量成正相关关系。
通过酶标仪在450nm波长下测量吸光度(OD值),从而计算出样品的浓度。试剂盒的组成包括96孔和48孔的配置,微孔酶标板以及标准品、样本稀释液、检测抗体-HRP、洗涤缓冲液、底物A和B。其中,标准品(S0-S5)的浓度依次为:0、25、50、100、200及400pg/mL,且本试剂盒应储存于2-8℃的环境中,有效期为6个月。
样本的收集及处理须特别注意:1. 血清应使用不含热源和内毒素的试管,并在收集后迅速离心以分离血清与红细胞;2. 血浆可使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂,离心后取上清;3. 细胞上清液应通过离心去除颗粒;4. 组织匀浆需将组织捣碎后离心取上清。如果样本检测不及时,建议将其分装并冻存于-20℃,以避免反复冻融。
在操作过程中,需配备加样器并定期校对其准确性,以减少试验误差,并保持加样时间控制在5分钟以内。此外,应在每次测定的同时进行标准曲线的绘制,尽量采用重复孔以保证实验的准确性。如样本中目标物质含量过高,应稀释样本后再进行测定,并在计算时考虑稀释倍数。
所有操作期间,务必遵循说明书的指导,最终结果应依据酶标仪的读数进行判定。同时,所有的样品和废弃物应按照传染性处理规定进行处理,确保实验室的安全与卫生。
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