尊龙凯时推出的本产品是一种基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具备多项显著特点。首先，它即开即用，用户只需提供样品DNA模板；其次，引物和其他组分经过优化，具备更高的灵敏度。同时，本产品提供阳性对照，以便于区分假阴性样品。该试剂盒的特异性极高，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA产生交叉反应。此外，试剂盒不仅可用于定性检测，也支持定量检测，定量检测线性范围至少可达5个数量级。每套产品足以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。请注意，本产品仅用于科研用途。

样品制备

尊龙凯时建议采用以下步骤进行样品制备： 一、DNA提取 使用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。二、稀释标准曲线样品 由于阳性对照浓度较高，后续稀释操作应在独立区域进行，以避免污染试剂盒其他成分。 1. 标记6个离心管，分别标记为7、6、5、4、3、2。 2. 使用带芯枪头向每个管中加入45μL DEPC-H2O。 3. 向7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准样品，放置在冰上待用。 4. 更换枪头，向6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准样品，放置在冰上待用。 5. 更换枪头，向5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL阳性对照，震荡1分钟，得到1×10E5拷贝/μL的标准样品，放置在冰上待用。 6. 重复上述操作，直至获得6个不同稀释度的标准样品。如不需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

试剂配制

准备N个待检样品，则需准备N+2个qPCR管（N个样品+1个阴性对照+6个阳性对照）。依照说明，向各PCR管中添加所需成分，并移至样本准备区。

模板添加

在qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

扩增反应

将PCR管置于PCR扩增仪器的样品槽中，并按照详细说明书设定扩增程序进行反应。

结果分析

1. 制作标准曲线时，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。通过待测样品的Ct值，从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，进而得出其浓度。 2. 若未制作标准曲线，按照以下标准判定结果：阳性对照结果为Ct值<30，显著指数增长，呈典型S型曲线，阴性对照如果Ct值为38或无Ct值则无任何明显的指数增长和平台期。样本检测结果：Ct值<35表示样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；若Ct值为38或无Ct值，则表明样本中未检测到该寄生虫，结果为阴性；若Ct值在35-38之间，需对样本进行复检，如重复结果仍在此范围内且有明显增长则判定为阳性，否则判定为阴性。

运输及保存

尊龙凯时产品需低温运输，保存于-20℃，保质期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。