一、实验准备

使用尊龙凯时提供的质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061进行实验准备。确保所有实验器械，包括聚硅酮处理的微量离心管和吸管尖端，均未接触其他蛋白质，以避免交叉污染。

二、单位定义

赖氨酰肽链内切酶的活性单位被定义为在30℃、pH 9.5条件下，每分钟能够产生1μmol对硝基苯胺的酶量。其公式为： AU/vial = [(a-b)/25] × (1/962) × (40/01)，其中a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、实验操作流程

为确保实验结果的准确性，按以下步骤操作：

1. 使用尊龙凯时的凝胶染色试剂盒，如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701），对蛋白样品进行电泳分离。
2. 从凝胶中切割蛋白质片段，并放入微量离心管中。
3. 使用专用脱色液体进行凝胶脱色处理。
4. 向试管中加入300μL乙腈，震荡30分钟。
5. 去除乙腈，并用Parafilm膜封住微量离心管。
6. 在Parafilm上打孔，进行15分钟的真空干燥。
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解在100mmol/L碳酸氢铵中，56℃下恒温1小时。
8. 在室温下冷却后，加入等量的50mM碘乙酰胺溶液，避光保持在45分钟，间歇涡旋混合。
9. 使用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 加入300μL乙腈，干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵对凝胶片段进行15分钟的膨胀处理。
12. 再次用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除残余液相，并进行15分钟的真空干燥。
14. 用100μL赖氨酰内切酶溶液在冰水浴中膨胀凝胶片段45分钟。
15. 去除赖氨酰内切酶溶液，将凝胶片段在37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5中孵育过夜。
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，振荡萃取多肽3次，每次20分钟。
17. 加入5%甲酸/50%乙腈，继续振荡萃取多肽3次，每次20分钟。
18. 如有需要，使用SpeedVac浓缩多肽。
19. 利用ZipTip进行多肽的脱盐和纯化。
20. 如果需要，用弱真空将多肽浓缩至2μL。
21. 最后加入基质以进行质谱分析。

四、购买渠道

如需购买尊龙凯时品牌的质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等产品，请联系北京百奥创新科技有限公司，我们期待为您提供优质服务！