## DNase和RNase检测背景

随着mRNA合成技术的广泛应用，生物制品的研究和工艺过程中的质量控制要求也日益提高。然而，在此过程中却存在大量脱氧核糖核酸酶（DNases）和核糖核酸酶（RNases）残留和污染的可能性。这些酶可能源自生物样品中存在的内源性DNase/RNase、用水、缓冲液及耗材表面，以及环境微生物和人类来源的外源性酶。此外，在某些生物制品的生产过程中，额外使用DNase/RNase去除宿主DNA和RNA的残留，也可能导致这些酶的残留。作为杂质，残留的DNase/RNase若进入人体，可能引发强烈的免疫反应，带来严重的安全风险。因此，精准分析和检测DNase/RNase的残留，将其控制在安全范围内，成为生物制品生产质量控制的重点之一。

## DNase和RNase检测方法的进展

传统的核酸酶检测方法主要包括比色法和凝胶电泳法。比色法基于Kunitz等的技术，通过向被测样本中添加DNA/RNA样本，并利用紫外分光光度计检测吸光度的变化，进而计算样本中DNase或RNase的浓度。凝胶电泳法则通过比较待测样本、阴性和阳性对照的带型明暗来判断是否存在DNA/RNA降解。近期，基于这些方法的改进也成为热点，例如利用二茂铁的电化学活性设计的检测技术，当DNase存在时，电流会发生变化。此外，仍有高效液相色谱分析法和放射性底物分析法等新方法被应用于检测。

尽管高效液相色谱分析法和电化学法能够达到较低的检出限和较高的灵敏度，但由于对设备的要求限制了它们的普适性。目前，核酸水解凝胶电泳法和紫外分光光度法仍是最常用的检测方法。然而，核酸水解凝胶电泳法因受实验人员主观判断影响，定量较为困难，操作耗时且测定通量低，量限不适合微量核酸酶的检测。而相较之下，荧光探针法以其高灵敏度、快速性和定量检测能力，成为检测DNase/RNase残留活性的一种理想选择。

## DNase和RNase检测相关法规

在《中华人民共和国药典2020年版》中，对于《人用疫苗总论》、《人用重组单克隆抗体制品总论》和《人用基因治疗制品总论》等类型的生物制品，均明确提出需对工艺中的核糖核酸酶残留进行控制。2023年4月，为进一步提升《中国药典》的标准，国家药典委员会开始研究核酸酶残留量检测方法，并提出核酸荧光底物法作为检测手段的草案。尽管目前相关标准尚未完全确定，但该方法在海外已得到广泛应用，如日本WAKO公司和德国Sartorius均将其作为质量认证的标准之一。

## 荧光探针法的检测原理与应用

基于核酸荧光底物法的检测技术通过设计标记荧光基团的DNA和RNA探针，形成与测试样本的混合。当样本中不含DNases或RNases活性时，荧光基团与淬灭基团的距离较近，不会发出荧光信号；当样本中存在DNases或RNases时，探针降解，荧光信号增加，且增强速率与酶的数量和活性呈正相关。这项技术已在不同场合得到应用，包括检测致病细菌、研究细胞外粘附蛋白与DNA的结合、以及实时监测纳米药物载体等。

## 尊龙凯时DNase和RNase检测试剂盒

尊龙凯时自主研发了基于核酸荧光底物法的DNase和RNase检测试剂盒。该试剂盒经过特别设计，能够识别多种DNase和RNase，以满足多种场景的检测需求。与某国际品牌相比较，尊龙凯时的试剂盒最低检出限低至其1/8，且完成了完整的验证，确保高质量控制。在测试过程中，尊龙凯时试剂盒干扰物种类更少，并可根据实际情况进行稀释测试。

### 产品特点：

• 灵活满足多种场景需求，适用于生物制品、无核酸酶耗材等检测。
• 高灵敏度和抗干扰性能优越。
• 经过完整的方法学验证，质量稳定。
• 长期供应，批内CV<10%，批间CV<15%。

### 真实样本测试案例：

• 一次性无酶多层共挤袋中添加无DNase无RNase的水作为待测样本，结果显示60个样本均无DNase残留。
• 不同纯化阶段的蛋白酶K样本测试结果与凝胶电泳法一致。
• 核苷酸样本的加标回收率均在70%~130%范围内。

通过尊龙凯时提供的高品质检测产品，您可以确保生物制品的安全性与有效性。