人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10% FBS +1%丙酮酸钠 +1% L-谷氨酸 +1% P/S

贴壁传代方法：建议第一次传代比例为1:2，传代时间为每2天更换培养基。请使用无菌离心管收集培养基，作为对比培养的基础。如果对比效果不理想，建议直接使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞收到后，应立即培养至状态良好，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。接收细胞时，请用75%的酒精对瓶子进行消毒，然后在超净操作台上进行操作，将细胞瓶置于37℃，5% CO2培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞稳定。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照留存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供照片，则默认收到的细胞状态良好。同样，传代后建议使用原瓶的完全培养基和自配的完全培养基进行对比培养，换液后请适度松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若当细胞密度超过80%，则应进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞形态变化。若细胞大部分圆形并脱落，迅速拿回操作台，轻击培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2 ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶传代（例如分至两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，使用PBS清洗一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞形态，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如需将细胞之后转入液氮罐，需先在-80℃冰箱中保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，随后用75%酒精消毒外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬组织并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中脱落，这是正常现象。如果脱落数量较多，可将培养瓶内的培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，以收集上清作过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后再加5ml完全培养基终止处理。接着再离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后在37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况

• 运输过程中丢失、瓶身破损、培养液泄漏等问题可重发；
• 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经核实后可重发；
• 细胞长时间静置后复苏状态不佳需提供清晰的细胞状态照片，方可重发；
• 提供前3天细胞照片，问题确认后可进行重发；

2）细胞出现问题，不予重发的情况

• 由于客户操作不当造成的细胞污染，不予重发；
• 由客户错误操作导致的细胞状态不良，不予重发；
• 使用非本库推荐培养体系而导致的细胞问题，不予重发；

确保您使用尊龙凯时提供的细胞与培养基，可为您提供最佳的实验效果。如有任何问题，欢迎联系我们的客服团队。