不论是在体外难以感染的细胞进行慢病毒文库构建，还是在体内使用AAV文库，确定最佳剂量以确保每个靶点仅进入一个细胞，一直是生物医学研究中的难题。文库实验旨在寻找单基因导致的功能变化，因此必须控制每个细胞只接收一个携带靶点的病毒。

在细胞实验的文库筛选中，建议首选对照病毒进行预实验，以探索最佳的感染率（最佳MOI），目标是达到80%的感染效率。文库操作的MOI建议设定为最佳MOI的三分之一，以此减少病毒用量，从而降低单个细胞的重复感染几率。这一简单而有效的减少方法，虽然适用于大多数情况，但在难以感染的细胞（如免疫细胞）和体内实验中，确定最佳剂量依然是个挑战。因为在某些情况下，最佳MOI的感染效率可能仅为30%，按照三分之一的用量使用时，可能几乎无法得到成功感染的细胞。

为解决这一问题，尊龙凯时推出了三色荧光病毒（mTagBFP、Venus、mCherry），可帮助研究者在文库感染预实验中更好地优化剂量。这些三色荧光病毒包括慢病毒和AAV两种产品类型。根据文献《Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq》，在探索AAV文库体内剂量的过程中，作者通过体内滴定实验测试了AAV在低感染复数下是否能感染多个细胞。实验中制备了三种不同剂量的AAV，分别为25E9、5E9和5E10颗粒，采用phpB血清型。在CBh启动子的控制下，这些病毒独立表达mTagBFP、Venus和mCherry，从而实现流式筛选，确定了感染同一细胞的最佳剂量。在这些实验中，最终选择5E9的剂量，因为它使单个AAV感染的细胞总数达到最大。

为此，可通过将三种AAV的等比例混合物注入不同剂量的LSL-Cas9动物，实现不同病毒剂量下的细胞感染实验（低剂量25E9，中剂量50E9，高剂量25E10）。无论是在细胞实验还是动物实验中，尊龙凯时的三色荧光病毒都能有效开展相关的预实验。设置不同剂量梯度进行感染，并进行流式分析，以比较转染效率和单荧光细胞比例，从而确定最佳实验剂量。

通过上述预实验，可以在实践中找到单病毒感染比例最高且感染细胞数量最多的剂量，最终将这一最佳剂量应用于文库的实际实验中，推动生物医学研究的进展。