尊龙凯时的实验方法分为几个步骤,主要用于培养和监测细菌的生长。以下是详细的步骤说明。
一、过夜培养
1. 将5ml预热的液体培养基移入一个无菌的16mm或18mm锥形管中。
2. 用接种环挑取一个单一菌落,浸入培养液中并轻轻摇动接种环,使待接种的细菌均匀分散在培养液中。
3. 盖好试管,并在摇床或转鼓式培养设备上以60转/分钟的速度,于37°C培养至饱和(细胞浓度达到1X109~2X109细胞/ml,约6小时)。
二、大容量培养
1. 在一个无菌的Erlenmeyer瓶或波纹瓶中,使用新鲜预热的培养液按1:100的比例稀释过夜培养物,烧瓶的体积应是培养液体积的5倍以上。如果不进行摇动,所需的烧瓶体积应大于培养液体积的20倍,以确保通气充足。
2. 在37°C下剧烈摇动培养,约300转/分钟。
三、利用计数板监测生长情况
1. 用一片干净的盖玻片覆盖一片清洁的计数玻片(或血球计数板)。
2. 小心地在盖玻片边缘滴一小滴培养液,使其在盖玻片下扩散。
3. 在相差显微镜下以400倍的放大倍率观察,并根据每个小方块中所见的细菌数量,估算细菌浓度,约为2X107细胞/ml。
四、利用分光光度计监测生长情况
由于仪器性能的差异,分光光度计应使用已知浓度的培养液进行校准。
1. 测量OD600值。为了确保读数准确,应将培养液稀释至OD600<1。
2. 根据每增加0.1的OD值,估算细菌浓度约为1X108细胞/ml。
以上步骤结合尊龙凯时的实验设备,可以有效地监测细菌的生长情况,为生物医疗研究提供可靠的数据支持。