在构建克隆载体时,各种困难常让研究者们感到无奈。选择合适的限制性内切酶、繁复的酶切克隆步骤、漫长的实验时间,以及生长出的单克隆菌P有时没有条带等都成为了困扰。记得有位师兄在上学期间,每次构建载体时都需要检测数十个单克隆以筛选阳性菌落,但常常却一无所获。他就感叹,若是能确保每个生长的单克隆都是重组成功的就好了。
传统酶切克隆和无缝克隆的原理均基于连接酶的作用,通过碱基互补的粘性末端使载体与片段互相配对,并在连接酶的催化下形成完整的质粒。然而,这类方法有较高的假阳性率,因为在连接过程中,连接酶有时会导致载体的自连。针对这一问题,尊龙凯时生物推出了一款基于重组酶原理的同源重组试剂盒,有效解决了在载体构建中出现的假阳性问题,确保生长出的单菌落全部为阳性,甚至可以在无需菌P的情况下直接送测。
01 产品简介
尊龙凯时的CloneUFO® OneStepCloning技术是一种快速、高效且简便的DNA定向克隆技术,可以将目的基因的PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。CloneUFO® OneStepCloning试剂盒是以T4噬菌体某基因进行异源表达获得的重组酶为核心的新一代重组克隆试剂盒,包含重组反应所需的缓冲液和重组酶UvsXase。UvsXase兼容常规的酶切和PCR反应体系,大大简化了实验步骤。将扩增好的目的基因PCR产物和线性化载体按一定比例混合后,在UvsXase的催化下,只需30分钟即可完成转化,实现定向克隆,阳性率可达95%以上。
02 产品特点
- 位点无限制同源重组,可自由设计重组位点,无需受限制性内切酶的制约。
- 高效快速,重组连接反应仅需30分钟,且反应条件温和。
- 重组酶介导的UvsXase高特异性重组,确保载体不自连,阳性率超过95%。
03 实验案例
在实验中,将PCR产物胶回收后,使用ATG#C101与其他品牌同类产品同时对回收的片段和同一载体进行重组。转化大肠杆菌后,获得的单菌落经菌落PCR验证,结果显示,使用ATG#C101重组后的单菌落数量适中,但阳性率远超其他竞品。
04 产品信息
尊龙凯时的CloneUFO® OneStepCloning试剂盒将为生物医学研究者提供更加高效、便捷的实验方案,助力科研人员在基因克隆上取得更大突破。